Medios de cultivo de la célula una reseña de las últimas noticias de bitcoin de la India

El cultivo celular es una de las principales técnicas en las ciencias de la vida. Es el término general utilizado para la eliminación de células, tejidos u órganos de un animal o planta y su posterior colocación en un entorno artificial que favorece su supervivencia y / o proliferación. Los requisitos ambientales básicos para que las células crezcan de manera óptima son: temperatura controlada, sustrato para la unión de las células y medio de crecimiento e incubadora adecuados que mantengan el pH y la osmolalidad correctos. El paso más importante y crucial en el cultivo celular es seleccionar un medio de crecimiento apropiado para el cultivo in vitro. Un medio de crecimiento o medio de cultivo es un líquido o gel diseñado para soportar el crecimiento de microorganismos, células o plantas pequeñas. Celda medios culturales generalmente comprenden una fuente apropiada de energía y compuestos que regulan el ciclo celular. Un medio de cultivo típico se compone de un complemento de aminoácidos, vitaminas, sales inorgánicas, glucosa y suero como fuente de factores de crecimiento, hormonas y factores de apego. Además de nutrientes, el medio también ayuda a mantener el pH y la osmolalidad.

Los aminoácidos son los componentes básicos de las proteínas y, por lo tanto, son ingredientes obligatorios de todos los medios de cultivo celular conocidos. Los aminoácidos esenciales deben incluirse en los medios de cultivo ya que las células no pueden sintetizarlos por sí mismos. Se requieren para la proliferación de células y su concentración determina la densidad celular máxima alcanzable. L-glutamina, un aminoácido esencial, es particularmente importante [28]. L-glutamina proporciona nitrógeno para NAD, NADPH y nucleótidos y sirve como una fuente de energía secundaria para el metabolismo. La L-glutamina es un aminoácido inestable que, con el tiempo, se convierte en una forma que las células no pueden usar y, por lo tanto, debe agregarse a los medios justo antes del uso [29]. Se debe tener precaución cuando se agrega más L-glutamina de la que se requiere en la formulación del medio original, ya que su degradación resulta en la acumulación de amoníaco, y el amoníaco puede tener un efecto perjudicial en algunas líneas celulares. Las concentraciones de L-glutamina para medios de cultivo de células de mamífero pueden variar desde 0,68 mM en Medio 199 a 4 mM en Dulbecco’s Modified Eagles’s Medium. Invertebrado cultivo de células los medios pueden contener tanto como 12,3 mM de L-glutamina. Los suplementos como el glutamax son más estables y pueden reemplazar a la glutamina para el cultivo a largo plazo de células lentas.

Las proteínas y péptidos usados ​​más comúnmente son la albúmina, la transferrina y la fibronectina. Son particularmente importantes en medios sin suero. El suero es una fuente rica en proteínas e incluye albúmina, transferrina, aprotinina, fetuina y fibronectina. La albúmina es la proteína principal en la sangre que actúa para unir agua, sales, ácidos grasos libres, hormonas y vitaminas, y la transporta entre los tejidos y las células. La capacidad de unión de la albúmina lo convierte en un eliminador adecuado de sustancias tóxicas de los medios de cultivo celular.

La aprotinina es un agente protector en los sistemas de cultivo celular, estable a pH neutro y ácido y resistente a altas temperaturas y degradación por enzimas proteolíticas. Tiene la capacidad de inhibir varias serina proteasas como la tripsina. La fetuína es una glucoproteína que se encuentra en el suero fetal y neonatal en concentraciones mayores que en el suero de un adulto. También es un inhibidor de las serina proteasas. La fibronectina es un jugador clave en la unión celular. La transferrina es una proteína de transporte de hierro que actúa para suministrar hierro a la membrana celular.

El suero es una mezcla compleja de albúminas, factores de crecimiento e inhibidores del crecimiento [36]. El suero es uno de los componentes más importantes de los medios de cultivo celular y sirve como fuente de aminoácidos, proteínas, vitaminas (particularmente vitaminas solubles en grasa como A, D, E y K), carbohidratos, lípidos, hormonas, factores de crecimiento, minerales y oligoelementos. Suero de origen bovino fetal y ternero se utilizan comúnmente para apoyar el crecimiento de las células en cultivo [37]. El suero fetal es una fuente rica de factores de crecimiento y es apropiado para la clonación celular y para el crecimiento de células fastidiosas [38]. El suero de ternero se usa en estudios de inhibición de contacto debido a sus propiedades de menor crecimiento. Los medios de crecimiento normales a menudo contienen 2-10% de suero. La suplementación de medios con suero cumple las siguientes funciones [39]:

• El suero proporciona los nutrientes básicos (tanto en la solución como vinculados a las proteínas) para las células. • El suero proporciona varios factores de crecimiento y hormonas involucradas en la promoción del crecimiento y la función celular especializada. • Proporciona varias proteínas de unión como albúmina, transferrina, que puede transportar otras moléculas a la célula. Por ejemplo: la albúmina transporta lípidos, vitaminas, hormonas, etc. a las células. • También proporciona proteínas, como la fibronectina, que promueven la unión de las células al sustrato. También proporciona factores de diseminación que ayudan a las células a extenderse antes de que comiencen a dividirse. • Proporciona inhibidores de proteasa que protegen las células de la preólisis. • También proporciona minerales, como Na +, K +, Zn2 +, Fe2 +, etc. • Aumenta la la viscosidad del medio y, por lo tanto, protege las células de daños mecánicos durante la agitación de los cultivos en suspensión. • También actúa como tampón.

DMEM tiene casi el doble de concentración de aminoácidos y cuatro veces la cantidad de vitaminas como EMEM, así como nitrato férrico, piruvato de sodio y algunos aminoácidos suplementarios. La formulación original contenía 1.000 mg / l de glucosa y se informó por primera vez para el cultivo de células de ratón embrionarias. Se ha demostrado que una variación adicional con 4500 mg / l de glucosa es óptima para el cultivo de varios tipos de células. DMEM es un medio basal y no contiene proteínas o agentes promotores del crecimiento. Por lo tanto, requiere que la suplementación sea un medio “completo”. Comúnmente se suplementa con 5-10% de suero bovino fetal (FBS). DMEM utiliza un sistema de buffer de bicarbonato de sodio (3.7 g / L) y por lo tanto requiere niveles artificiales de CO 2 para mantener el pH requerido. Los medios en polvo se formulan sin bicarbonato de sodio porque tienden a desgasificarse en estado pulverizado. Los medios en polvo requieren la adición de 3.7 g / l de bicarbonato de sodio al disolverlo en agua. DMEM se usó inicialmente para el cultivo de células madre embrionarias de ratón. Se ha encontrado que es ampliamente aplicable en células primarias de ratón y de pollo, formación de placas virales y estudios de inhibición por contacto.

Invitrogen es uno de los principales proveedores de medio DMEM. Los medios Invitrogen DMEM se usaron para cultivar la línea celular de fibroblastos de riñón de mono COS-1 con el fin de estudiar el efecto de la interacción entre UBE1L y el dominio de PML para ISG15ilación en PML / RARalfa [52], para realizar injertos heterotópicos con el fin de mostrar células mieloides derivadas del saco vitelino [53], para investigar el efecto de una subunidad alfa de la proteína G unida al extremo C sobre la tasa de reciclaje y el destino post-endocítico del receptor beta2AR [54], a cultura células para investigar el papel del factor de transcripción Ets-1 en la regulación de la expresión del Receptor de péptido natriurético-A [55], para realizar cultivos celulares con el fin de demostrar que la variación natural en las plantas podría ser inducida por la modulación del silenciamiento de la cromatina [56] , para llevar a cabo el cultivo de células con el fin de estudiar el mecanismo de la regulación de AMPK hacia el reloj circadiano [57] y muchos otros [58 – 62].

Otros proveedores también proporcionaron los medios DMEM, como ATCC [86], Biochrom [87], Industrias biológicas [88], BioWhittaker [89, 90], Caisson labs [91], Cambrex Biosciences [92], Cellgro [76, 93 – 97], Chemicon [98], Fisher Scientific [99, 100], Hyclone [101 – 103], Lonza [104, 105], Mediatech [56, 106 – 110], Nissui Pharmaceutical Co [71, 111], PAA [112, 113], PAN Biotech [114], Peprotech [115], SAFC Biosciences [116], Welgene [117] y Dundee Cell Products [118].

También se han citado otros medios, incluidos Medium YPD [252-254] para el crecimiento de levadura, medio de insecto TC-100 [237, 255, 256] para cluture de células de insecto, medio de crecimiento de células endoteliales-2 (EGM-2) [257 – 264] para células endoteliales, medio 199 [56, 95, 265 – 269], IMDM [141, 170, 270, 271], medio de cultivo fenomenal [252, 272], medio de diferenciación de células del músculo esquelético [273, 274], Shields y Sang insecto medio [275, 276], medio MethoCult [277-291], M9 medios mínimos [282, 283], medio de crecimiento epitelial mamario [214, 284], medio MCDB 131 [285-287], medio M2 [ 113, 288-290], medio de separación de linfocitos [291, 292], medio M16 [288, 289], medio de crecimiento de queratinocitos [221, 293], medio L-15 de Leibovitz [160, 179, 294-296], insecto Xpress medio [244], suplemento medio Epilife [297], medio de crecimiento ESF 921 [244, 298], medio Express Five SF [246, 247], 1 suplemento líquido ITS [299], medio AIMV [271], Barbour-Stoenner -Kelly-H (BSK-H) medio [300], BBL Brewers modificado t medio hioglycolato [301], medio BGJ [302], medio BioWhittaker Ultraculture [303], medio BMGY [304], medio de crecimiento de células epiteliales bronquiales [132], medio infusión Caldo corazón [123], medio de separación de linfocitos Cellgro [150], CnT07 media [130], EPC medio [305], ESGRO Complete PLUS Clonal Grade Medium [119], Ex-CELL 400 medium [306], explant medium [56], Graces medio de cultivo de células de insectos [307], HBSS medium [123] , 308], hepatocito HCMTM medio cultural [309], Hibernate E media [310], Histopaque density media [292], Hybridoma SFM media [103], HyQ-SFX insect serum free medium [294], Insect Medium Supplement [311], IPL-41 medium [312] , Medio LHC-8 [59], medio LHC-9 [313], medio Linsmaier y Skoog (LS) [314], medio M17 [315], medio M3: 10 [316], medio MCDB153 [317], medio 200 [318], medios de expansión de células madre mesenquimales [102], medios MesenPro [319], medios de cultivo de tejidos libre de metionina / cisteína [320], medio de cultivo MSC [305], suplemento de medio de cultivo N1 [137], medio PrEC [321] , medio basal epitelial renal [250], medio rico definido [322], medio S2 [311], medio dextrosa Sabouraud [323], medio libre de suero libre [324], medio libre de suero que contiene medio Neurobasal-A [ 325], medio N2.1 libre de suero [150], medio SFM4CHO [326], SFX-Insect Medium [327], medio de crecimiento del músculo esquelético [117], medio SFEM StemSpan [328], medio de tioglicolato [329], T medio condicionado por linfocitos [330], medio VP-SFM [ 142], medio YNB [254], medios de diferenciación de adipocitos [331], medios de diferenciación de condrocitos [331], medio EGM-2 [163], medio basado en metilcelulosa M3434 [332], medios Mesencult [331], medios de Murashige y Skoog [333].

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